气相色谱质谱联用仪GC-MS技术讲解

一 气相色谱质谱联用仪器系统

二 气相色谱质谱联用的接口技术

三 气相色谱质谱联用中常用的衍生化方法

四 气相色谱质谱联用质谱谱库和计算机检索

五 气相色谱质谱联用技术的应用

下面,让我们一起来看看吧!

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仪器系统|一

(一)GC-MS系统的组成

气质联用仪是分析仪器中较早实现联用技术的仪器。自1957年霍姆斯和莫雷尔首次实现气相色谱和质谱联用以后,这一技术得到长足的发展。在所有联用技术中气质联用,即GC-MS发展最完善,应用最广泛。目前从事有机物分析的实验室几乎都把GC-MS作为主要的定性确认手段之一,在很多情况下又用GC-MS进行定量分析。另一方面,目前市售的有机质谱仪,不论是磁质谱、四极杆质谱、离子阱质谱还是飞行时间质谱(TOF),傅里叶变换质谱(FTMS)等均能和气相色谱联用。还有一些其他的气相色谱和质谱联接的方式,如气相色谱-燃烧炉-同位素比质谱等。GC-MS逐步成为分析复杂混合物最为有效的手段之一。

GC-MS联用仪系统一般由图中所示的各部分组成。

气相色谱仪分离样品中各组分,起着样品制备的作用;接口把气相色谱流出的各组分送入质谱仪进行检测,起着气相色谱和质谱之间适配器的作用,由于接口技术的不断发展,接口在形式上越来越小,也越来越简单;质谱仪对接口依次引入的各组分进行分析,成为气相色谱仪的检测器;计算机系统交互式地控制气相色谱、接口和质谱仪,进行数据采集和处理,是GC-MS的中央控制单元。

(二)GC-MS联用中主要的技术问题

气相色谱仪和质谱仪联用技术中主要着重要解决两个技术问题:

1.仪器接口

众所周知,气相色谱仪的入口端压力高于大气压,在高于大气压力的状态下,样品混合物的气态分子在载气的带动下,因在流动相和固定相上的分配系数不同而产生的各组分在色谱柱内的流速不同,使各组分分离,最后和载气一起流出色谱柱。通常色谱往的出口端为大气压力。质谱仪中样品气态分子在具有一定真空度的离子源中转化为样品气态离子。这些离子包括分子离子和其他各种碎片离子在高真空的条件下进入质量分析器运动。在质量扫描部件的作用下,检测器记录各种按质荷比分离不同的离子其离子流强度及其随时间的变化。因此,接口技术中要解决的问题是气相色谱仪的大气压的工作条件和质谱仪的真空工作条件的联接和匹配。接口要把气相色谱柱流出物中的载气,尽可能多的除去,保留或浓缩待测物,使近似大气压的气流转变成适合离子化装置的粗真空,并协调色谱仪和质谱仪的工作流量。

2.扫描速度

没和色谱仪联接的质谱仪一般对扫描速度要求不高。和气相色谱仪联接的质谱仪,由于气相色谱峰很窄,有的仅几秒钟时间。一个完整的色谱峰通常需要至少6个以上数据点。这样就要求质谱仪有较高的扫描速度,才能在很短的时间内完成多次全质量范围的质量扫描。另一方面,要求质谱仪能很快地在不同的质量数之间来回切换,以满足选择离子检测的需要。

(三)GC-MS联用仪和气相色谱仪的主要区别

GC-MS联用后,仪器控制、高速采集数据量以及大量数据的适时处理对计算机的要求不断提高。一般小型台式的常规检测气质联用仪由个人计算机及其Windows95或Windows支持。而大整研究用的GC-MS联用仪,主要是磁质谱或者多级串联质谱大都有小型工作站及其Unix系统支持。为方便用户使用,随着个人计算机CPU和软件的迅速发展,不少大型GC-MS联用仪的计算机系统开始采用PC。

GC-MS联用后,气相色谱仪部分的气路系统和质谱仪的真空系统几乎不变,仅增加了接口的气路和接口真空系统。

GC-MS联用后,整机的供电系统不仅变化不大。除了向原有的气相色谱仪、质谱仪和计算机及其外设各部件供电以外,还需向接口及其传输线恒温装置和接口真空系统供电。

气质联用法和其他气相色谱法作一简单比较,可见如下一些性能和操作上的区别:

(1)GC-MS方法定性参数增加,定性可靠。GC-MS方法不仅与GC方法一样能提供保留时间,而且还能提供质谱图,由质谱图、分子离子峰的准确质量、碎片离子峰强比、同位素离子峰、选择离子的子离子质谱图等使GC-MS方法定性远比GC方法可靠。

(2)GC-MS方法是一种通用的色谱检测方法,但灵敏度却远高于GC方法中的通用检测器中任何一种。GC方法中常用的只有FID和TCD是通用检测器,其余都是选择性检测器,与检测样品中的元素或官能团有关。

(3)虽然用气相色谱仪的选择性检测器,能对一些特殊的化合物进行检测,不受复杂基质的干扰,但难以用同一检测器同时检测多类不同的化合物,而不受基质的干扰。而采用色质联用中的提取离子色谱、选择离子检测等技术可降低化学噪声的影响,分离出总离子图上尚未分离的色谱峰。在色质联用技术中,高分辨质谱的联用仪检测准确质量数、串联质谱(时间串联或空间串联)的选择反应检测或选择离子子离子检测等均能在一定程度上降低化学噪音,提高信噪比。

(4)从气相色谱和色质联用的一般经验来说、质谱仪定量似乎总不如气相色谱仪,但是,由于色质联用可用同位素稀释和内标技术,以及质谱技术的不断改进,色质联用仪的定量分析精度极大改善。在一些低浓度的定量分析中,接近多数气相色谱仪检测器的检测下限时,色质联用仪的定量精度优于气相色谱仪。

(5)气相色谱方法中的大多数样品处理方法、分离条件、仪器维护等都要保持,移植成为色质联用的方法。在色质联用中选择衍生化试剂时,要求衍生化物在一般的离子化条件下能产生稳定的,合适的质量碎片。

(6)气相色谱法中,经过一段时间的使用,某些检测器需要清洗。在色质联用中检测器不常需要清洗,最常需要清洗的是离子源或离子盒。离子源或离子盘是否清洁,是影响仪器工作状态的重要因素。柱老化时不联接质谱仪、减少注入高浓度样品、防止引入高沸点组分、尽量减少进样量、防止真空泄漏、反油等是防止离子源污染的方法。气相色谱工作时的合适温度参数均可以移植到色质联用仪上,其他各部件的温度设置要注意防止出现冷点,否则,GC-MS的色谱分辨率将会恶化。

(四)GC-MS联用仪器的分类

GC-MS仪器的分类有多种方法,按照仪器的机械尺寸,可以初略地分为大型、中型、小型三类气质联用仪;又可以按照仪器的性能,初略地分为高档、中档、低档三类气质联用仪或研究级和常规检测级两类。按照质谱技术,GC-MS通常是指四极杆质谱或磁质谱,GC-ITMS通常是指气相色谱-离子阱质谱,GC-TOFMS是指气相色谱-飞行时间质谱等。按照质谱仪的分辨率,又可以分为高分辨(通常分辨率高于5000)、中分辨(通常分辨率在1000和5000之间)、低分辨(通常分辨率低于1000)气质联用仪。小型台式四极杆质谱检测器。(MSD)的质量范围一般低于1000。四级杆质谱由于其本身固有的限制,一般GC-MS分辨率在2000以下。市场占有率较大、和气相色谱联用的高分辨磁质谱一般最高分辨率可达60000以上。和气相色谱联用的飞行时间质谱(TOFMS),其分辨率可达5000左右。

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接口技术|二

(一)接口技术评价

GC-MS联用仪的接口是解决气相色谱和质谱联用的关键组件。理想的接口是能除去全部载气,但却能把待测物毫无损失地从气相色谱仪传输到质谱仪。实际工作中甩传输产率Y、浓缩系数N、延时t和峰展宽系数H来评价接口性能(见表)。当Y→100%、足够的N,t→0、H→1的该接口几乎达到理想状态。

表中为接口性能评价参数及意义。

(二)常用接口介绍

常见各种GC-MS接口的一般性能及其适用性比较见表中所示。

在色质联用技术的发展过程中,还出现过许多其他接口方式,如分子流式分离器,利用分子量小,流导大容易除去的原理,分离载气和样品;如有机薄膜分离器,利用对有机气体选择性溶解,使作为载气的无机气体和样品分离;又如钯" 银管分离器,利用钯" 银管对氢的选择反应传输而达到分离的目的;等等。由于这些分离器总体性能都不如表11-3-2中所列接口,因此只在一些很特殊的场合下使用。

1 直接导入型接口(Direct coupling)

内径在0.25至0.32的毛细管色谱柱的载气流量在1-2ml/min。这些柱通过一根金属毛细管直接引入质谱仪的离子源。这种接口方式是迄今为止最常用的一种技术。其基本原理见图中所示。毛细管柱沿图中箭头方向插入,直至有1-2mm的色谱柱伸出该金属毛细管。载气和待测物一起从气相色谱柱流出立即进入离子源的作用场。由于载气氦气是惰性气体不发生电离,而待测物却会形成带电粒子。待测物带电粒子在电场作用下加速向质量分析器运动,而载气却由于不受电场影响,被真空泵抽走。接口的实际作用是支撑插入端毛细管,使其准确定位。另一个作用是保持温度,使色谱柱流出物始终不产生冷凝。

使用于这种接口的载气限于氦气或氢气。当气相色谱仪出口的载气流量高于2ml/min时,质谱仪的检测灵敏度会下降。一般使用这种接口,气相色谱仪的流量在0.7-1.0ml/min。色谱柱的最大流速受质谱仪真空泵流量的限制。最高工作温度和最高柱温相近。接口组件结构简单,容易维护。传输率达100%,这种联接方法一般都使质谱仪接口紧靠气相色谱仪的侧面。这种接口应用较为广泛。

2.开口分流型接口

色谱柱洗脱物的一部分被送入质谱仪,这样的接口称为分流型接口。在多种分流型接口中开口分流型接口最为常用。其工作原理见图中所示。

气相色谱柱的一段插入接口,其出口正对着另一毛细管,该毛细管称为限流毛细管。限流毛细管承受将近0.1MPa的压降,与质谱仪的真空泵相匹配,把色谱柱洗脱物的一部分定量地引入质谱仪的离子源。内套管固定插色谱柱的毛细管和限流毛细管,使这两根毛细管的出口和入口对准。内套管置于一个外套管中,外套管充满氦气。当色谱柱的流量大于质谱仪的工作流量时,过多的色谱柱流出物和载气随氦气流出接口;当色谱柱的流量小于质谱仪的工作流量时,外套管中的氦气提供补充。因此,更换色谱柱时不影响质谱仪工作,质谱仪也不影响色谱仪的分离性能。这种接口结构也很简单,但色谱仪流量较大时,分流比较大,产率较低,不适用于填充柱的条件。

3.喷射式分子分离器接口

常用的喷射式分子分离器接口工作原理是根据气体在喷射过程中不同质量的分子都以超音速的同样速度运动,不同质量的分子具有不同的动量。动量大的分子,易保持沿喷射方向运动,而动量小的易于偏离喷射方向,被真空泵抽走。分子量较小的载气在喷射过程中偏离接受口,分子量较大的待测物得到浓缩后进入接受口。喷射式分子分离器具有体积小热解和记忆效应较小,待测物在分离器中停留时间短等优点。

还有一些其他的分子分离器接口,但现在市售的GC-MS仪器一般采用直接导入较多,故不再对其他的分子分离器作过多的介绍。

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衍生化方法|三

在GC-MS方法分析实际样品时,对羟基、胺基、羧基等官能团进行衍生化往往起着十分重要的作用。主要有以下一些益处:

(1)改善了待测物的气相色谱性质。

待测物中一些极性较大的基团的存在,如羟基、羧基等气相色谱特性不好,在一些通用的色谱柱上不出峰或峰拖尾,衍生化以后,情况改善。

(2)改善了待测物的热稳定性。

某些待测物,热稳定性不够,在气化时或色谱过程中分解或变化,衍生化以后,待测物定量转化成在GC-MS测定条件下稳定的化合物。

(3)改变了待测物的分子质量。

衍生化后的待测物绝大多数是分子量增大,有利于使待测物和基质分离,降低背景化学噪音的影响。

(4)改善了待测物的质谱行为。

大多数情况下,衍生化后的待测物产生较有规律、容易解释的质量碎片。

(5)引入卤素原子或吸电子基团,使待测物可用化学电离方法检测。很多情况下可以提高检测灵敏度,检测到待测物的分子量。

(6)通过一些特殊的衍生化方法,可以拆分一些很难分离的手性化合物。

当然,衍生化方法应用不当,也会带来一些弊端,例如:①柱上衍生化有时会损伤色谱柱。②某些衍生化试剂需在氮气气流中吹干除去,方法不当会有损失。③衍生化反应不完全,会影响灵敏度。④衍生化试剂选用不当,有时会使待测物分子量增加过多,接近或超过一些小型质谱检测器的质量范围。

GC-MS检测中选用衍生化试剂除了和气相色谱中选择衍生化试剂相同的准则以外,还应注意到衍生化产物的质谱特性:质量碎片特征性强,分子量适中,适合质量型检测器检测,也有利于与基质干扰物分离,表中列出了GC-MS中常用的衍生化方法。


谱库与计算机检索|四

随着计算机技术的飞速发展,人们可以将在标准电离条件(电子轰击电离源,70eV电子束轰击)下得到的大量已知纯化合物的标准质谱图存贮在计算机的磁盘里,作成已知化合物的标准质谱谱库,然后将在标准电离条件下得到的,已被分离成纯化合物的未知化合物质谱图与计算机内存的质谱谱库内的质谱图按一定的程序进行比较,将匹配度(相似度)高的一些化合物检出,并将这些化合物的名称、分子量、分子式、结构式(有些没有)和匹配度(相似度)给出,这将对解析未知化合物,进行定性分析有很大帮助。目前,质谱谱库已成为GC-MS联用仪中不可缺少的一部分,特别是用GC-MS联用仪分析复杂样品,出现数十个甚至上百个色谱峰时,要用人工的方法对每一个色谱峰的质谱图态解析,那是十分困难的,要耗费大量的时间和人力。只有利用质谱谱库和计算机检索,才能顺利、快速地完成GC-MS的谱图解析任务。

(一)常用的质谱谱库

用标准电离条件———电子轰击电离源,70eV电子束轰击已知纯有机化合物,将这些标准质谱图和有关质谱数据存贮在计算机的磁盘中就得到了质谱谱库,目前最常用的质谱谱库有以下一些:

(1)NIST库由美国国家科学技术研究所出版,最新版本收有64K张标准质谱图。

(2)NIST/EPA/NIH库是由美国国家科学技术研究所(NIST)、美国环保局(EPA)和美国国立卫生研究院(NIH)共同出版,最新版本收有的标准质谱图超过129K张,约有107K个化合物及107K个化合物的结构式。

(3)Wiley库 有3种版本。第六版本的Wiley库收有标准质谱图230K张;第六版本的Wiley/NIST库收有标准质谱图275K张;Wiley选择库(Wiley Select Libraries)收有90K张标准质谱图。在Wiley库中同一个化合物可能有重复的不同来源的质谱图。

(4)农药库(Standard Pesticide Libraray) 内有340个农药的标准质谱图。

(5)药物库(Pffeger Dryg Libraray) 内有4370个化合物的标准质谱图,其中包括许多药物、杀虫剂、环境污染物及其代谢产物和它们的衍生化产物的标准质谱图。

(6)挥发油库(Essential Oil Libraray) 内有挥发油的标准质谱图。

在这6个质谱谱库中前三个是通用质谱谱库,一般的GC-MS联用仪上有配有其中的一个或两个谱库。目前用的最广泛的是NIST/EPA/NIH库。后三个是专用质谱谱库,根据工作的需要可以选择使用。

(二)NIST/EPA/NIH库及其检索简介

现在,几乎所有的GC-MS联用仪上都配有NIST/EPA/NIH库,各仪器公司所配用的NIST/EPA/NI库所含有的标准质谱图的数目可能有所不同,这可能是与各仪器公司选择的谱库版本不同,配置也有所不同。如1992年版本的NIST/EPA/NIH库收有62235个化合物的标准质谱图,而NIST/EPA/NIH选择复制库还有12592张标准质谱图可以安装。还有14个不同定位的使用者库可与NIST/EPA/NIH库结合使用。质谱工作者还可将自己实验中得到的标准质谱图及数据用文本文件存在使用者库中,或者自己建立使用者库。这些都使不同仪器公司提供的NIST/EPA/NIH库所含有的标准质谱图的数目有所不同。

NIST/EPA/NIH库的检索方式有两种:一种是在线检索,一种是离线检索。

在线检索是将GC-MS分析时得到的、已扣除本底的质谱图,按选定的检索谱库和预先设定的库检索参数、库检索过滤器与谱库中存有的质谱图进行比对,将得到的匹配度(相似度)最高的20个质谱图的有关数据(化合物的名称、分子量、分子式、可能的结构、匹配度等等)列出来,供被检索的质谱图定性作参考。

离线检索是在得到一张质谱图后,根据这张质谱图的有关信息,从质谱谱库中调出有关的质

谱图与其进行比较。通过比较,可对该质谱图作出定性分析。离线检索的检索方式有以下几种:

(1)ID号检索 ID号是NIST/EPA/NIH库给每一个化合物规定识别号———即该化合物在库中的顺序号。只要直接输入该化合物的ID号(如果已知),就可以将此化合物的标准质谱图调出进行比较。

(2)CAS登记号检索 CAS登记号是每个化合物在化学文摘服务处登记的号码。如已知该化合物的CAS登记号,就可以用CAS登记号检索。只要输入CAS登记号,就可以将此化合物的标准质谱图调出进行比较。

(3)NIST库名称检索如知道该化合物在NIST库中的名称,就可以用此名称进行检索。

(4)使用者库名称检索按该化合物在使用者库中的准确名称进行检索。

(5)分子式检索给出化合物的特定分子式就可以用分子式检索。将这一分子式输入后,就可以给出库中符合这一分子式的全部化合物的标准质谱图。

(6)分子量检索将分子量输入后,就可以给出库中符合这一分子量的全部化合物的标准质谱图。

(7)峰检索将得到的质谱数据接峰的质量数(m/z)和相对强度(基峰为100,其他峰以基峰强度的百分数表示)范围依次输入。如知道最大质量数,可在Maxmass栏内输入。如从分子离子上有中性丢失,可在Loss栏内输入,这一丢失的最大值是m/z=64。如输入0,则此质谱图一定有分子离子峰。在输入这些峰的数据后就可得到一系列化合物的标准质谱图。输入的峰越多,输入的相对强度范围越窄,检出的化合物数量就越少,甚至检不出化合物来。此时可减少输入的峰或放宽相对强度范围,就可检出化合物。

(三)使用谱库检索时应注意的问题

为了使检索结果正确,在使用谱库检索时应注意以下几个问题。

(1)质谱库中的标准质谱图都是在电子轰击电离源中,用70eV电子束轰击得到的,所以被检索的质谱图也必须是在电子轰击电离源中,用70eV电子束轰击得到的,否则检索结果是不可靠的。

(2)质谱谱库中标准质谱图都是用纯化合物得到的,所以被检索的质谱图也应该是纯化合物的。本底的干扰往往使被检索的质谱图发生畸变,所以扣除本底的干扰对检索的正确与否十分重要。现在的质谱数据系统都带有本底扣除功能,重要的是如何确定(即选择)本底,这就要靠实践经验。在GC-MS分析中,有时要扣除色谱峰一侧的本底,有时要扣除峰两侧的本底。本底扣除时扣除的都是某一段本底的平均值,选择这一段的长短及位置也是凭经验决定。

(3)在总离子流图中选择哪次扫描的质谱图进行检索,对检索结果的影响也很重要。当总离子流的峰很强时,选择峰顶的扫描进行检索,可能由于峰顶时进入离子源的样品量太大,在离子源内发生分子-离子反应,使质谱图发生畸变,得不到正确的检索结果。笔者就曾发现,当选择总离子流强度很大的扫描时,由于分子离子反应,出现了(2M+1)+,(2M)+或(2M-1)+的情况。当被检索的峰前干扰严重时(如检索主峰后的峰时),往往在峰的后沿处选择质谱图进行检索;当被检索的峰后干扰严重时(如检索主峰前的峰时),往往在峰的前沿处选择质谱图进行检索。这样做就是要尽可能避免被检索的质谱图被其他物质所干扰。

(4)要注意检索后给出的匹配度(相似度)最高的化合物并不一定就是要检索的化合物,还要根据被检索质谱图中的基峰,分子离子峰及其已知的某些信息(如是否含某些特殊元素—F、Cl、Br、I、S、N等等,该物质的稳定性、气味等等),从检索后给出的一系列化合物中确定被检索的化合物。

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应用|五

GC-MS联用在分析检测和研究的许多领域中起着越来越重要的作用,特别是在许多有机化合物常规检测工作中成为一种必备的工具。如环保领域在检测许多有机污染物,特别是一些浓度较低的有机化合物,如二口恶英等的标准方法中就规定用GC-MS;药物研究、生产、质控以及进出口的许多环节中都要用到GC-MS;法庭科学中对燃烧、爆炸现场的调查,对各种案件现场的各种残留物的检验,如纤维、呕吐物、血迹等检验和鉴定,无一不要用到GC-MS;工业生产许多领域,如石油、食品、化工等行业都离不开GC-MS;甚至竞技体育运动中,用GC-MS进行的兴奋剂检测起着越来越重要的作用。